New Tech'in tam otomatik nükleik asit ekstraksiyon ve tespit makinesi

Beş güç:
● Nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırılmış adımla yapılandırılmış cihaz
● Ultrasonik ekstraksiyon modülüyle yapılandırılmış cihaz
● Cihaz tam otomatik olarak yapılandırılmıştır.
● Değişken sıcaklık amplifikasyonu ile yapılandırılmış cihaz
● Cihaz tamamen kapalı reaktif kitiyle yapılandırılmıştır

1. Nükleik asit tespit reaktiflerinin ekstrakte edilmesi ve saflaştırılması gerekiyor mu?
Nükleik asit tespitinin prensibi şu şekildedir: primerin etkisi altında, DNA polimeraz şablon DNA/RNA üzerinde zincir reaksiyonu amplifikasyonu gerçekleştirmek için kullanılır (NA'nın ters transkripsiyonunu gerektirir) ve ardından salınan floresan sinyal miktarı tespit edilerek belirlenir. numunenin tespit edilecek patojenin nükleik asidini (DNA/RNA) içerip içermediği.

1) Ekstrakte edilmemiş veya saflaştırılmamış örnekler, nihai sonucu etkileyen birçok bileşen içerebilir: nükleaz (hedef nükleik asidi çözebilen ve yanlış negatife neden olabilen), proteaz (DNA polimerazı azaltabilen ve yanlış negatife neden olabilen), ağır metal tuz (sentazın inaktivasyonuna yol açar ve yanlış pozitifliğe neden olur), çok asidik veya çok alkalin PH (reaksiyonun başarısız olmasına neden olabilir), Eksik RNA (yanlış negatif ters transkripsiyon başarısızlığına yol açar).

2)Bazı numunelerin doğrudan amplifikasyonu zordur: Gram pozitif ve bazı parazitler, kalın hücre duvarları ve diğer yapıları nedeniyle, nükleik asit ekstraksiyonu ve saflaştırma işleminden geçmezlerse ekstraksiyonsuz kit bu konuda başarısız olabilir. örnekler.

Bu nedenle, nükleik asit ekstraksiyon adımıyla yapılandırılmış test kitinin veya cihazın seçilmesi önerilir.

2. Kimyasal ekstraksiyon mu yoksa fiziksel ultrasonik parçalanma ekstraksiyonu mu?
Genel olarak konuşmak gerekirse, ön arıtma ve Saflaştırma işlemlerinin çoğuna kimyasal ekstraksiyon uygulanabilir.Ancak kalın duvarlı Gram-pozitif bakterilerde ve bazı parazitlerde kimyasal ekstraksiyonun etkili nükleik asit şablonları elde edememesi de hatalı negatif tespite neden olan bir durumdur.Ek olarak, kimyasal ekstraksiyonda sıklıkla güçlü ajanlar kullanılır; eğer elüsyon tam değilse reaksiyon sistemine güçlü alkali eklemek kolaydır ve bu da hatalı sonuçlara yol açar.

Ultrasonik parçalama, insan kullanımına yönelik POCT alanında lider bir kuruluş olan GeneXpert tarafından başarıyla kullanılan ve bazı karmaşık örneklerin (Mycobacterium tuberculosis gibi) nükleik asit ekstraksiyonunda mutlak bir avantaja sahip olan fiziksel kırmayı kullanır.

Bu nedenle, bir nükleik asit ekstraksiyon adımıyla yapılandırılmış bir test kitinin veya cihazının seçilmesi önerilir.ve ultrasonik bir ekstraksiyon modülünün olması en uygunudur.

3. Manuel, Yarı otomatik ve tam otomatik?
Bu, işgücü maliyeti ve iş verimliliği sorunudur.Günümüzde yeterli sayıda personel bulunmayan evcil hayvan hastanelerinde nükleik asit ekstraksiyonu ve tespiti belli beceri ve tecrübe gerektiren bir iştir.Tam otomatik nükleik asit ekstraksiyon ve tespit makinesinin mükemmel seçim olduğuna şüphe yoktur.

4. Sabit sıcaklık amplifikasyonu mu yoksa değişken sıcaklık amplifikasyonu mu?
Amplifikasyon reaksiyonu bir nükleik asit tespit bağlantısıdır ve bu bağlantıda yer alan profesyonel teknoloji karmaşıktır.Kabaca söylemek gerekirse, nükleik asidi çoğaltmak için enzimler kullanılır.Amplifikasyon sürecinde güçlendirilmiş floresans sinyali veya gömülü floresans sinyali tespit edilir.Genel olarak konuşursak, floresans sinyali ne kadar erken ortaya çıkarsa numunenin hedef gen içeriği o kadar büyük olur.

Sabit sıcaklık amplifikasyonu, sabit bir sıcaklıkta bir nükleik asit amplifikasyonu iken, değişken sıcaklık amplifikasyonu, kesinlikle denatürasyon-bağlama-uzatmaya göre döngüsel bir amplifikasyondur.Değişken sıcaklık amplifikasyon süresi, cihazın sıcaklık artış ve düşme oranından büyük ölçüde etkilenirken sabit sıcaklık amplifikasyon süresi gerçekleştirildi (şu anda birçok üretici yaklaşık 30 dakikada 40 amplifikasyon döngüsü gerçekleştirebilmektedir).

Laboratuvar koşulları iyi ve imar sıkıysa ikisi arasındaki doğruluk farkının çok büyük olmayacağını söylemek mantıklı olur.Ancak değişken sıcaklıkta amplifikasyon, nispeten daha kısa sürede daha fazla nükleik asit ürününü sentezleyecektir.Kesin bölgeleme ve profesyonel eğitim personeli olmayan laboratuvarlar için, nükleik asit aerosol sızıntısı riski daha büyük olacaktır; sızıntı meydana geldiğinde yanlış pozitif ortaya çıkar ve bunun ortadan kaldırılması son derece zordur.

Ek olarak, Sabit sıcaklık amplifikasyonu, numune karmaşık olduğunda spesifik olmayan amplifikasyona daha yatkındır (bağıl reaksiyon sıcaklığı daha düşüktür ve uzatma sıcaklığı ne kadar yüksek olursa, primer bağlanma spesifikliği o kadar iyi olur).

Mevcut teknoloji söz konusu olduğunda değişken sıcaklık amplifikasyonu daha güvenilirdir.

5. Nükleik asit amplifikasyon ürünlerinin sızıntı riski nasıl önlenir?
Şu anda, birçok üretici sürtünme ile kapatılan nükleik asit reaksiyon tüpü olarak bez tipi PCR tüpünü seçmektedir ve değişken sıcaklık PCR amplifikasyonunda değişken sıcaklık denatürasyonundaki sıcaklık denatürasyonu 90 dereceye ulaşmaktadır.
Santigrat.Tekrarlanan ısıyla genleşme ve soğukla ​​büzülme süreci, PCR tüpünün sızdırmazlığı için büyük bir zorluktur ve bez tipi PCR tüpünün sızıntıya neden olması nispeten kolaydır.

Reaksiyon ürününün sızıntısını önlemek için reaksiyonun tamamen yalıtılmış bir kit/tüp ile benimsenmesi tercih edilir.Nükleik asit ekstraksiyonu ve tespiti için tamamen kapalı bir kit geliştirilebilirse mükemmel olurdu.

Yani New Tech'in yeni tam otomatik nükleik asit ekstraksiyon ve tespit makinesi yukarıdaki beş optimal seçeneğe sahiptir.